Adelmidrol, een analoog van palmitoylethanolamide, vermindert chronische ontsteking (nieuwste wetenschappelijke onderzoek)

J.   Cel.   Mol.   Med.   V ol   13,   Nee   6,   2009   pp.   1086-1095 (Als u geïnteresseerd bent in dit wetenschappelijke artikel over Adelmidrol, bekijk dan dit originele artikel via dit referentienummer van Journal)

 

 

 

Adelmid r ol,   een   palmit o ylethanolamide   analoog ,   reduceert c h risch   ontsteking   in   een   carr a een in -gra n oeloma   model-   in   ratten

 

Daniele   de   Filippis   een,   b ,   Alessandra   D'Amico   een,   b ,   Maria   Pia Cinelli   c , Giuseppe   Esposito   d ,   Vincenzo   di   Ma r zo   een,   e ,   T eresa   Iuvone   een,   b,   *

 

een   endocannabinoid   Resea r ch   Groep

b Afdeling   van   experimenteel   Pharmacolog y ,   Università   van   Napels "Federico   II”,   Napels,   Italië

c Dipartimento   di   Scienze   Biomo r fologiche,   Via   Pansini   Universiteit   van   Napels "Federico   II”,   Napels,   Italië

d Afdeling   van   menselijk   Fysiologie   en   farmacologie   " V.   Erspamer”   Universiteit   van   Rome "La   Sapienza”,   Rome, Italië

e   Instituut   van   Biomoleculaire   Chemicus ,   Consiglio   Nazionale   delle   Rijst r che,   Pozzuoli,   Napels, Italië

 

Ontvangen:   december   14,   2007;   Aanvaard:   april   14,   2008

 

 

Abstract

 

palmitoylethanolamide   (ERWT)   en   sommige   van   haar   analogen   hebben   getoond   Super goed   werkzaamheid   in   de   behandeling   van   pijn   en   ontsteking.   Adel midrol

-   de   Internationale   Niet-eigendomsrechten   Naam   (CAFE)   van   de   di-amide   derivaat   van   azelaïnezuur   zuur   -   is   een   van   deze   analogen.   De   ontstekingsremmend   en   pijnstillend   bijwerkingen   van   ERWT   en   adelmidrol   zijn   veronderstelde   naar   worden   gemedieerde,   op   minst   in   een deel,   door   mast   cel   down-modulatie.   Mast cel   mediators   vrijgelaten   op   vroeg   stadium   van   de   inflammato r y   werkwijze   rijden   de   inflammato r y   reactie   naar   chroniciteit   als   het   gebeurt   in λ -carrageenin-geïnduceerde granulomateuze   zakdoek   vorming.   In   de   aanwezig   stud y ,   de   keuze   van   testing   adelmidrol   hangt er van af   op   de   fysiek- ochemisch   eigenschappen   van   de   verbinding,   d.w.z   de   amfipatisch   voorzien zijn van,   dat   maken   het   meer   gemakkelijk   oplosbaar   dan   ERWT.   In   deze   stud y ,   wij   onderzocht   de   effect   van   adelmidrol   op   granuloma   vorming   geïnduceerde   door   λ -carrageenin-geweekt   spons   implantaat   in   ratten.   Onze resultaten   laten zien   dat het   lokale administratie   van   de   compoun d   unde r   stud y   significant   verlaag s   wegen t   een d   neo-angiogenesi s   i n   granulomatou s   weefsel .   De ontstekingsremmende werking   effec t   wa s du e   t o   de modulat ie   o f   mas t   cel s   degranulatie ,   een s   toon n   ja   histologica l   analysi s en d   ja   de remming   van de e   vrijgeven e   o f   severa l   pro-inflammato r y   een d   pro-angiogeni c   enzym s   ( bijv .   iNOS ,   chymas e   een d   metalloproteinas e   MMP-9) ,   een d   bemiddelaars ( bijv .   nitri c   oxid e   een d   TNF- a ) .   Th   resultaat s   indicat e   Dat is het   adelmidrol ,   geef n   locall y ,   ma y   represen t   een   potentia l   therapeuti c   te l   i n   aansturen van chroni c   ontsteking.

 

sleutelwoorden:   ontsteking     mast   cellen     palmitoylethanolamide     adelmidrol

 

Invoering


 

Adelmidro l   ik ben   de e   Internationa l   Niet-eigendomsrechten   Nam e   (INN )   o f   een syntheti c   derivaat e   o f   azelai c   zuur ,   een   naturall y   occurrin g   verzadigde d   dicarboxyli c   zuur ,   Dat is het   ik ben   foun d   i n   soms   whol e   graan s   een d   in trac e hoeveelheid s   i n   het huma n lichaam   [1] ,   het is   plasm a   niveau s   normaal   rangin g   van m   2 0   t o   8 0   ng / ml . Chemicall y ,   ademidro l   ik ben   de N, N   -bi s   (2-hydroxyethyl )   nee n   anediamid e   en d   ik ben   een amfifiel c   o r   amphipathi c   samenstelling ,   bezit van g   bot h   Hydrofiel   een d   hydrophobi c   eigenschappen ,   Dat is het   favou r   het is   oplosbaarheid   boh h i n   aqueou s   een d   organi c   media .   Th   fysicochemica l   eigenschappen o f   de e   compoun d   mak e   ik niet   vooral   geschikt   voorb   topica l   toe-

 

 

*Correspondentie   naar:   Prof.   T eresa   IUVONE, Dipartimento   di   Farmacologia   Sperimentale, Università   van   Napels   “Federico   II”,

Via   D.   Montesano   49,   Napoli   80131,   Ital y . T eg .:   + 39-081678429

Fax:   + 39-081678403

E-mail:   iuvone@unina.it


catio n   een d   een n   adelmidro l   (2% )   emulsio n   ha s   recentl y   getoond   weldaad   i n   een   pilo t   stud y   o n   mil d   atopi c   dermatitis   [2] .   Het effect   o f   adelmidro l   ha s bee n   toon n   t o   afhankelijk ,   een t   leas t   i n   deel, o n   de e   contro l   o f   mas t   cel l   activering .   Densitometri c   een d   morphometri c   analyseer s   o f   ski n   biopsie s   van m   experimenta l   huidwond s   showe d   Dat is het   treatmen t   verstand h   adelmidro l   le d   t o   een toenemend e   i n   de e   mas t   cel l   granula r   densit y ,   daar   suggestie g   een verlaging e   i n   thei r   degranulatio n   [3 ,   4] .   Accordin g   t o   chemische structuur   een d   cellula r   mechanis m   o f   actie ,   adelmidro l   vandaar behoren s   t o   de e   famil y   o f   ALIAmide s   (Autacoi d   Loca l   Inju r y Antagonis t   Amides) ,   dat wil zeggen   fatt y   aci d   amiden ,   wie is e   vermeende mechanis m   o f actio n   ik ben   de e   down-modulatio n   o f mas t   cel degranulatio n   [5-7] .   Palmitoylethanolamide e   (PEA )   ik ben van mening d   t o   b e   de e   paren t   molecul e   o f   ALIAmides .   PE A   ik ben   van nature aanwezig   bot h   i n   anima l   een d   vegetabel   weefsel s   [8 ,   9 ]   een d   ik ben   in staat om   verbetering   bot h e e   cannabinoi d   een d   vanilloi d   signalering   systeem   [10] ,   neerwaarts regulerend g   de e   degradatio n   pad s   o f   endo- cannabinoi d   een d   endovanilloi d   samengestelde s   [11 ,   12] .   Th   exact


 

 


mechanis m   o f   actio n   o f   PE A   ik ben   nee t   gij t   wel   weet n   alhoewel h   PEA ma y interac t   verstand h   peroxisom e   proliferato r -activate d   recepto r - α , die h   lijken s   t o   b e   betrekken d   i n   soms   o f   het is   ontstekingsremmend effect   [13 ]   een d   verstand h   de e   orpha n   G-proteïne-koppel d   recepto r , GPR5 5   [14] .   Th   ontstekingsremmende werking   een d   analgesi c   effect s   van PE A   hav   bee n   herhaaldelijk   rapporte d   [15-19 ]   een d   Hoe dan ook   te b e   verschuldigd ,   een t   leas t   i n   deel ,   t o   het is   abilit y   t o   down-modulat e   mas t   cel activatie n   een d   mas t   cel l   mediato r   vrijgeven e   bot h   i n vitr o   [5 ,   20,

21 ]   een d   i n   viv o   [22 ,   23] .   Mas t   cel s   ar e   Hoog   gespecialiseerde

immuniteit   effecto r   cel s   dat ,   accordin g   verstand h   thei r   granul e   inhoud , ma y   b e   verdelen d   int   tw o   subpopulaties :   slijmvliezen l   mestcel s   hoofdzakelijk   presen t   i n   de e   mucos a   o f   respirato ry   een d   darm- a l   traktaten ,   een d   connectiv e   mas t   cel s   plaats d   preferentiall y   i n   huid [24] .   In   eithe r   classica l   immunologica l   IgE-afhankelijke activatie   o r   i n   respons e   t o   een   variet y   o f   stimuleer ik   [25] ,   mas t   cellen vrijgeven e   thei r winkel d   een d   nieuw   synthetiseren d   bemiddelaars ,   inclusief g   cytokine s   (TNF- a ) ,   histamine e   een d   pro-inflammato ry en pro-angiogeni c   bemiddelaar s   suc h   een s   chymase ,   collagenase ,   stikstofmonoxide ,   IL- 1   een d   IL- 6   (voor a   revie w   se e   [26]) .   Mas t   cel s   ar e   nu considere d   een   beste r   toneelstuk   i n   de e   promotie n   een d   voortzetting o f   chroni c   ski n   ontsteking n   [27 ]   een d   hav   recentl y   zijn gedefinieerd d   een s   een   'centra l   cellula r   switchboar d   o f   pruritogeni c   huidontsteking '   [28] .   Wij   hav   toon n   Dat is het   mas t   cel l   mediators, release d   een t   graaf y   stag e   o f   de e   inflammato r y   proces ,   pla y   een   pivotica l   rol e   i n   een   classica l   modus l o f   chroni c   ontsteking ,   dat wil zeggen   de λ -carrageenin-induceren d   granulom a   formaat n   [29] .   I n   feit ,   in g granuloom ,   mas t   celafgeleide d   vasoactiv e   bemiddelaar s   trigger de e   angiogeni c   proces s   essentia l   voorb   de e   onderhoud   o f   weefsel pe r fusio n   een d   voorb   sustainin g   cellula r   traffi c   [30] .   Bot h   deze gebeurtenis s   ar e   strictl y   vereisen d   voorb   de e   ontwikkelaars t   o f   de e   Cuta- neou s   granulomatou s   tissu e   [31] .   O n   al l   deze e   aannames, d e   ai m   o f   de e   presen t   stud y   ik ben   t o   evaluat e   de e   effec t   van adelmidrol ,   welke h   voorb   het is   chemica l   structur e   ik ben   prearrange d   contro l   dermatologica l   pathologieën ,   i n   een modus l   o f   chroni c   Cuta- neou s   ontsteking n   sustaine d   ja   mas t   cellen ,   dat wil zeggen   granuloom induceren d   ja   λ -carrageenin-soake d   spons e   implantats.

 

 

 

 

materialen   en   methoden

 

Spons   implantatie

 

Mannetje   Wistar   ratten   (Harlan,   Italië),   weging   200-220   g,   waren   gebruikt   in   alle experimenten.   Dieren   waren   voorzien   met   eten   en   water   advertentie   libitum .   Het licht   fiets   was   automatisch   gecontroleerde   (op   07   hrs   00   min .;   uit   19   hrs   00 min.)   en   de   kamer   temperatuur-   thermostaat   gereguleerd   naar   22   ±   1 ° C met   60   ±   5%   humidit y .   voorafgaand   naar   de   experimenten,   dieren   waren   gehuisvest   in deze   voorwaarden   voor   3-4   dagen   naar   worden   geacclimatiseerd.   sponzen   geïmplanteerd   als   eerder   beschreven   door   de   Filippis   et   al .   [31].   Briefl y ,   twee polyether   sponzen   (0,5   X   1,5 x   2.0   cm) wegen   0,035   ±   0,002   g   geïmplanteerd   subcutaan   op   de   terug   van   ratten   ( n   =   12-18   voor   elk   groep) onder   algemeen   anesthesie   met   pentobarbital   (60   mg / kg).   sponzen   en surge r y   gereedschap   waren   gesteriliseerd   door   autoclaveren   voor   20   min.   op   120 ° C.   λ -car-

rageeni n   (1 %   w / v )   (Sigma )   wa s   oplossen d   i n   pyrogeenvrij e   salin e   en injecteer d   int   eac h   spons e   i n   presenc e   o r   absenc e   o f   10 0   μ l   o f   verschillende adelmidro l   solutio n   (15 ,   30 ,   7 0   mg / ml )   i n   fina l   volum e   o f   0. 5   ml / spons; salin e   (0. 5   ml / spons )   wa s   gebruik d   een s   controle .   I n   soms   G e b ru ik e n GW647 1   ( 5   mg / ml) ,   een   goed bekend n   antagonis t   o f   P P AR-alf a   receptor wa s   adde d   i n   de e   presenc e   o f   de e   hoogtes t   concentratio n   o f   Adelmidrol. Ninety-si x   uur s   afte r   spons e   implantaat ,   ratten   wer e   kille d   i n   atmosfeer e   van CO 2 . Th   granulomatou s   tissu e   aroun d   de e   spons e   wa s dissecte d   door gebruik te maken van   een   surgica l   mes ,   gewogen ,   snel bevroor je n   i n   liqui d   stikstof ,   en sla d op   een t   - 80 ° C.   Anima l   auto e   een s   wel   een s   al l   experiment s   wer e   i n   accor- danc e   verstand h   Europea n   Communit y   Counci l   Directiv e   86/609 / EE C   en inspanning s   wer e   gek   t o   minimiseren   anima l   lijden   een d   t o   reduceren e   de e   nummer r   o f   dierlijk   gebruikt.

 

 

evaluatie   van   angiogenese

 

angiogenese   was   geëvalueerd   door   beide   hemoglobine   inhoud   meting en histologisch   onderzoeken.

 

 

Hemoglobine   inhoud   meting

De   granulomateuze   zakdoek,   d.w.z   de   nieuwe   vorming   zakdoek   inkapselen   de spons,   was   verzamelde   en   afgemeten   met   een   balans   weging   min   0.02 tot max   300   g   (KERN   EG300-EM)   altijd   door   de   zelfde persoon   wie   was   geblindeerd   voor   de   behandelingen.   In   sommige experimenten, de   granulomateuze   zakdoek   werd gehomogeniseerd   op   ijs-   met   de   Polytron   PT300   zakdoek   homogenisator   in

1   X   PBS   (4   ml   elke g   van   nat   gewicht) .   Briefl y ,   afte r   centrifugatie   een t

250 0   X   g   voorb   2 0   min .   een t   4 ° C ,   de e   superna t mieren   wer e   furthe r   centrifuge d   op

500 0   X   g   voor   30   min.   en   hemoglobine   concentratie   in   de   supernatant was   vastbesloten   spectrofotometrisch   op   450   nm   pe r gevormd   met   de hemoglobine   testkit   (Sigma   Diagnostic).   De   hemoglobine   inhoud   werd uitgedrukt   als   mg   hemoglobine / g   van   nat   gewicht.

 

 

histologische   onderzoek

Na   96   hrs   van   spons   implantaten,   de   granulomateuze   zakdoek   in de omgeving van   de spons   was   verwijderd   en   vast   in   10%   formaline.   Paraffinewas   secties waren   besnoeiing   op   4-6   μ m   en   gebrandschilderd   met   hematoxyline   en   eosine   voor   de   evaluatie   van   bloed   schepen.

 

 

Mast   cel   telling

Dun (0.5   urn )   geparaffineerde   sectie   waren   bereid   en   gebrandschilderd   met   toluidine blauw   volgens   naar   Iuvone   et   al .   [25]   en   dan   verwerkte   voor   lichtmicroscopie   examen.   MC   telling   was   pe r gevormd   op   vijf   willekeurig geselecteerd   secties   gebruik makend van   een x100   doelstelling   lens.

 

 

MPO   activiteit

 

myeloperoxidase   (MPO)   activit y ,   een   indicator   van   polymorfonucleaire   (PMN) accumulatie,   was vastberaden.   granulomateuze   weefsels   werden gehomogeniseerd in   een   oplossing   bevattende   0,5%   (w / v)   hexadecyl-trimethylammonium   broedmedium ontbinden d   i n   10 m   potassiu m   fosfaat e   buffe r   (p H   7 )   en   c n n - getritureerd   voor   30   min.   op   20.000   g   op   4 ° C.   Een   evenmatig   van   de   bovendrijvende   was toen   toegestaan   naar   Reageer   met   een   oplossing   van   tetra-methyl-benzidine   (1.6   mm) en   0.1   mm   H 2 O 2 .   De beoordeling   van   verandering   in   absorptie   was   afgemeten


 

 


spectrofotometrisch   op   650   nm.   MPO   activiteit   was   bepaald   als   de   aantal stuks   van   enzym   onterende   1   mmol   van   waterstof   peroxide / min   op   37 ° C   en was   uitgedrukt   in   units   per   gram   gewicht   van   nat   zakdoek.

 

 

nitriet   analyse

 

nitriet   productie,   als   de   stal   metabolieten   van   salpeter-   oxyde,   was   gemeten i n   24-uurs cultuur d   granulomatou s   weefsel s   supernatanten .   Briefl y ,   de granulomateuze   weefsels   waren   gewogen   en   plated   in   een   6   multi-wells   plaat volgens   naar   Iuvone   et   al .   [32].   Na   24   uur,   de   medium   van   gekweekte   granulomateus   zakdoek   (0,1 ml)   was   toegevoegd   naar   een   Gelijke hoeveelheid   van   Griess-reagens (1%   sulfanilamide,   0,1%   naphtylendiammine,   2,5%   H3P04 )   en toegestaan op   kamer   temperatuur-   voor   10   min.   De   absorptie   van   vormde   chomofoor e   wa s   bepalen d   gebruik   een   UV / zichtbaarheid   spectrofotomete r   een t 55 0   nm. nitriet   levels   waren   vastbesloten   gebruik makend van   een   natrium   nitriet   standaard-   cu r ve   en uitgedrukt   als   μ mol / l.

 

 

nitriet   en   nitraat   analyse

 

Nitrit e   een d   nitraat e   productio n   wer e evalueren d   i n   granulomatou s   dingen .   Briefl y ,   weefsel s   wer e   coole d   ik ben ijskoud d   distille d   salin e   en gehomogeniseerd .   Th   crud e   homogenat e   wa s   centrifuge d   een t   21.00 0   g   voor

2 0   min .   een t   4 ° C ,   een d   aliquot s   o f   de e   supernatan t   wer e   gebruik d   t o   bereken NO x   niveaus .   Nitrit e   presen t   i n   de e   monster s   wa s   bepalen d   ja   vermindering van nitraat e   enzymatisch   pe r forme d   verstand h   de e   enzym e   nitraat e   reductase (Sigma-Aldrich ,   Dorset ,   VK )   een d   Nicotinamide-adenine e   Dinucleotide Phosphat e   (NADPH )   een t   roo m   temperatur e   ( R T )   voorb   3   uur   Th   hoeveelheid o f   NO x   wa s   maat d   volg   de e   Gries s   reactio n   Iuvon e   e t   al .   [25].

 

 

W estern   vlek   analyse

 

Granulomatou s   weefsel s   wer e   weeg d   een d   snel   homogeniseren d   i n   6 0   μ l o f   ice-col d   hypotoni c   lysi s   buffe r   (1 0   m m   HEPES ,   1. 5   m m   MgCl 2 ,   1 0   mm KCl ,   0. 5 m m   fenylmethylsulfony l   fluoride ,   1. 5 μ g / m l   soybea n   t ypsin inhibito r ,   pepstati n   EEN   7 μ g / ml ,   leupepti n   5 μ g / ml ,   0. 1   m m   benzamidine,

0. 5   m m   dithiothreito l   [DTT] )   een d   incuberen d   i n   ic e   voorb   4 5   min .   Afte r   deze keer ,   de e   cytoplasmi c   fractie s   wer e   de n   obtaine d   ja   centrifugatie   op

13,00 0   g   voorb   1   min .   en proteïnen   concentratio n   i n   de e   monster s   wa s   deter-

mijn d   verstand h   Bio-Ra d   assa y   ki t   (Bio-Ra d   Laboratoria ,   Hij rekent ,   CA ,   USA) accordin g   t o   de e   instructies van de fabrikant .   Immunoblottin g   analysi s   van inducibl e   nitri c   oxid e synthas e   (iNOS) ,   tumou r   necrosi s   facto r - α   (TNF- a ) Chymas e   een d   MMP-9 ,   CD-31 ,   T ubuli n   wer e   pe r forme d   o n   een cytosolische fractio n   o f   cultuur d   exemplaren .   Cytosoli c   fractio n   eiwit s   wer e   gemengd met h   ge l   laden   buffe r   (5 0   m m   T ris ,   10 %   SDS ,   10 %   glycerol   2-me r cap-toethanol ,   2   m g   broomfenol / ml )   i n   een   rati o   o f   1: 1   v / v ,   boile d   voorb   5   min. een d centrifuge d   een t   10,00 0   g   voorb   1 0   min .   Protei n   concentratio n   wa s   bepalen d   een d   equivalente t   hoeveelheid s   (5 0   μ g )   o f   eac h   bemonstering e   wer e   gescheiden unde r   verkleinen   voorwaarde s   i n   12 %   SDS-polyac r ylamid e   minigel .   Th   bescherming   transferre d   ont o   nitrocellulos e   membran e   accordin g   t o   van de fabrikant   instructie s   (Bio-Ra d Laboratories) .   Afhankelijk van   upo n   de experimenten ,   de e   membraan s   wer e   blocke d   ja   incubatie   een t   4 ° C nachts   i n   hig h   sal   buffe r   (5 0   m m   T rizm a   basis ,   50 0   m m   NaCl ,   0,05% T ween-20 )   insluiten   5 %   bovin e seru m   albumine ;   de y   wer e   de n   incubatie   voorb   1   h r   verstand h   anti-iNO S   (1: 200 0   v / v )   (B D   Biowetenschappen ,   Pharmingen, Italië) ,   anti-TNF - α   (1:25 0   v / v )   (Sigm a   Aldrich) ,   anti-Chymas e   (1:50 0   v / v)

(NeoMarkers ,   Fremont ,   CA ,   VS) ,   anti-MMP- 9   (1:10 0   v / v )   (NeoMarkers), anti-CD-3 1   (1: 1000v / v )   (Diaclone ,   Frankrijk )   een d   anti-bet a   T ubuli n   (1: 1000) (Sigm a   Aldrich )   voorb   2   hr s   een t roo m   temperatuur ,   volge d   ja   incubatie met h   specifi c   horseradis h   peroxidas e   (HRP) -conjugat e   ten tweede   anti- lichaam y   (Dako ,   Glostrup ,   Denemarken) .   Th   immuniteit   complexe s   wer e   ontwikkelaar d   pe r forme d   verstand h   verbeter d   chemiluminescentie e   detectio n   reagentia (Amersham ,   Italië) ,   accordin g   t o   de e   fabrikant   instructie s   en bloot d   t o   Koda k   X-Oma t   film .   Th   protei n   band s   o f   eiwit s   o n   X-ray fil m   wer e   scanne d   een d   densitometrischall y   analyseren d   verstand h   een   GS-70 0   beeld in g   densitomete r   (Bio-Ra d   Laboratories).

 

 

Statistieken

 

resultaten   waren   uitgedrukt   als   de   gemiddelde   ±   SEM   van   n dieren   waar   elke waarde   is   het gemiddelde   van   reacties   in   duplicaat   sites.   statistisch   vergelijkingen waren   gemaakt   door   een manier   ANO V A   gevolgd   door   Bonferroni 's   test   voor   meerdere vergelijkingen.   P     0.05   was   beschouwd   naar   worden   significant.

In   alle   reeks   van   experimenten,   analyse   van   lineair   regressie   was   pe r gevormd tot   schatten   een   concentratieafhankelijke   relatie.

 

 

 

resultaten

 

Effect   van   adelmidrol   op   granuloma   vorming

 

De   implantaat   van   λ -carrageenin-geweekt   sponzen   op   de   terug   van   ratten veroorzaakt   een   significant   toename   van   granulomateuze   zakdoek   vorming rond   de   spons   op   96   uur,   geëvalueerd   als   de   nat   gewicht   van   weefsel rond   de   spons   (1,67   ±   0,079   g   versus   zoutoplossing   0.61   ±   0,042   g; P     0.001).   single   administratie,   op   tijd   0   (dat wil zeggen   de   implantatietijd ),   van   adelmidrol   (15,   30,   70   mg / ml)   resulteerde   in   een   significant en   concentratieafhankelijke   kleiner worden   in   granuloma   formatie (door   15,   28,   44%   respectievelijk;   P     0.001).   De   ademidrol   effect op   granulomateuze   zakdoek   vorming,   was   niet   omgekeerd   door   het gebruik   van   GW6471,   een   krachtig   en   selectief   antagonist   van   P P AR-alpha   receptor   (Fig.   1A).

 

 

Effect   van   adelmidrol   op   leukocyten   infiltratie

 

Adelmidrol   (15,   30,   70   mg / ml)   verminderde   in   een   significant   en   concentratie-afhankelijke manier   de   leukocyten   infiltratie   in   de   granulozend   zakdoek,   op   96   uur,   geëvalueerd   als   myeloperoxidase   activiteit (21,   44,   72%   remming   respectievelijk;   P     0.001)   als   vergeleken   naar λ -carrageenin   alleen   (1.8   ±   0,54 mU / 100   mg   nat   zakdoek;   P     0,001 versus   zoutoplossing)   (Fig.   1B).

 

 

Effect   van   adelmidrol   op   pro-inflammato r y   markers

 

Th   effec t   o f   adelmidro l   o n   tw o   o f   de e   mos t   studie d   pro inflammato ry   marker s   wa s beoordeeld .   Adelmidro l   (15 ,   30 ,   7 0   mg / ml) getoond   een   significan t   een d   concentratieafhankelijkheid t   remming


Effect   van   adelmidrol   op   nitriet   productie

 

Adelmidro l   sterk   verminder d   nitrit e   een d   nitraat ,   stabl e   metabolieten o f   nitri c   oxide ,   evalueren d   bot h   i n   homogeniseren s   van m   granulomateuze tissu e   een t   de e   uitleg t   tim e   (26 ,   40 ,   73 %   inhibitie   versu s   carrageenin alon e   3 7   ±   0,60 0   μ moli / tissue ;   P     0,001 )   een d   vrijgave d   van m   weefselkweek d   i n   plaat s   voorb   furthe r   2 4   hr s   (23 ,   46 ,   69 %   inhibitie   versus carrageeni n   alon e 3 3   ±   0. 4   μ mol / weefsel ;   P     0,001 )   (Fig .   3 A   een d   B).

 

 

Effect   van   adelmidrol   op   mast   cellen

 

Fig.   4A   shows   de   toluïdine   blauw   gebrandschilderd   granulomateuze   weefselsecties .   T reatment   met   λ -carrageenin   (b)   geïnduceerde   een   significante mast   cel   degranulatie   (licht   blauw   gebrandschilderd   cellen,   d.w.z   degranulated cellen,   in   vergelijking   naar   de   diep   blauw   gebrandschilderd   cellen,   d.w.z   niet- gedegranuleerd   mast   cellen);   meer dan één ,   histologische   analyseert   toonde dat   mast   cellen   zijn   hoofdzakelijk   gelegen   in   dichtbij   nabijheid   bloed   schepen.   Adelmidrol   (c)   was   in staat   naar   verminderen   mestcel   degranatie .   Moreove r ,   histologische   analyse   van   granulomateuze   weefsel toonde   dat   adelmidrol   (70   mg / ml)   plaatselijk   toegediend   op   tijd

0,   gereduceerd   de   aantal   van   mast   cellen   door   52%   ( P     0.001)   in   com-

klomp   naar   carragenin   alleen   (104.6 6   ±   1.6 7   numbe r   o f   mas t   cellen

P     0,00 1   versu s   zoutoplossing)   (Fig.   4B).

De resultaten   zijn   parallel   naar   de   W estern   vlek   analyse   voor   beide chymes   (Fig.   4C)   en   MMP-9   (Fig.   4D)   eiwit   uitdrukking   dat waren   gevonden   naar   worden   aanzienlijk   en   concentratie-afhankelijk verminderd   door   adelmidrol   (15,   30,   70   mg / ml)   respectievelijk   door   24,   39,

57%   ( P     0.001   in   vergelijking   naar   carragenin   alleen   9.6   ±   0.85   OD

=   mm 2 ,   P     0.001   versus   zoutoplossing)   en   door   21,   39,   60%   ( P     0.001 in vergelijking   naar   carragenin   alleen   5.33   ±   0.19   OD   =   mm 2 ,   P  

0.001   versus   zoutoplossing),   respecteer y .

Effect   van   adelmidrol   op   angiogenese

 

W e   bestudeerd   de   effect   van   adelmidrol   op   vaartuig   vorming,   beide geëvalueerd   als   hemoglobine   (Hb)   inhoud   en   uitdrukking   van   CD31   eiwit,   een   markeerstift   van   endotheliale   cellen.   Als   getoond   in   Fig.   5A,   adelmidrol (15,   30,   70   mg / ml)   aanzienlijk   en   concentratie-afhankelijk verminderd   Hb   inhoud   in   granulomateuze   zakdoek   door   23,   42,   60%   ( P  

0.001)   in   vergelijking   naar   alleen carrageenin (53.4   ±   1.72   mg   Hb / g

zakdoek;   P     0.001   versus   zoutoplossing).   immunoblotting   analyse   van   CD31 is   geïllustreerd   in   Fig.   5B   en   shows   dat   adelmidrol   aanzienlijk   en concentratie-afhankelijk   remde   λ -carrageenin-geïnduceerd   CD31-eiwit   uitdrukking   in   granulomateuze   zakdoek   door   24,   43,   60%   in vergelijking   naar   carragenin   alleen   (8.45   ±   0.78   OD   =   mm 2 ).   De resultaten   werden bevestigd   door   histologische   analyse   van   granulomateus weefsel   gebrandschilderd   met   hematoxyline / eosine   tonen   een   diep   afname van   vaartuig   aantal   na   adelmidrol   behandeling   (Fig.   5C).

 

 

Discussie

 

In   de   aanwezig   stud y ,   wij   onderzocht   de   potentieel   beschermend   effect van   adelmidrol,   een   analoog   van   ERWT,   in   een   model-   van   chronisch   ontsteking ,   dat wil zeggen   de e   λ -carrageenin-induceren d   granulom a   i n   ratten. Hoewel   ERWT   is   de   meest   grondig   herkend   ALIAmide,   verschillende   voorgaand   studies   hebben   puntig   naar   de   gebruik   van   ERWT   analogen en   homologen,   ting   naar   exploiteren   hun   verschillend   fysiek   en chemisch   eigenschappen   en   de   familielid   bijwerkingen   [33-35].   In   lijn   hiermee   idee,   in   de   aanwezig   studie   wij   hebben   gekozen om   schatten   het effect   van   de   ERWT   analoog   adelmidrol,   van wie   fysisch-chemische eigenschappen   gunst   haar   gebruik   in   huid   aandoeningen.   In   feit,   adelmidrol   heeft goed   oplosbaarheid   beide   in   waterig   en   biologisch   media,   welke   biedt   goed   transepidermal   absorptie.